上海BD VDJ单细胞测序服务

单细胞转录组测序是在单细胞水平上高通量测序分析基因表达谱的技术，突破传统高通量测序的局限性，组织解离后，单个样本一次上机能捕获500-20000个细胞，基于每个细胞分别建库测序，获得单个细胞的基因结构和基因表达状态，并鉴定细胞的类型，可以在不同样本间从细胞类型的组成和丰度角度进行比较，反映细胞间的异质性。而2021年横空出世的10XGenomicsChromiumX平台实现了单块chip上的百万级别通量的细胞捕获，系统实现16个通道同时运行，每个通道可捕获2000-20000个细胞（不混样），并支持原ChromiumController体统外的多种细胞捕获百万级别通量实验，可准确鉴别稀有细胞类型和适配大规模单细胞研究。烈冰科技已建立了多种国际和国内主流的高通量测序实验平台和自主研发国产化实验平台。上海BD VDJ单细胞测序服务

对于单细胞测序而言，常常需要先构建细胞图谱，在此基础上再开展后续各项分析，并且数据分析时以细胞聚类（cellcluster）为讨论对象，而不是像常规Bulk测序一样以组别为分析对象，因此单细胞测序项目对样本入组要求没有Bulk测序那样严格，但是单细胞测序，特别是目的为图谱研究时，需要通过提高样本复杂度（增加样本数），尽可能的构建某一疾病类型、群体细胞图谱信息。因此，单细胞测序实验设计时首先需要保证生物学重复，不同样本来源的样本建议单独进行细胞解离和捕获、建库、测序，以保证捕获到足够的细胞数，单个样本分别捕获细胞时，后续分析除了整体分析以外，还可以做单样本分析，保证分析的完备准确性。烈冰生物单细胞实验服务BD Rhapsody平台在细胞捕获过程中没有偏好性，可同样无差别捕获中性粒细胞。

据不完全统计，截至2022年6月，烈冰生物助力发表单细胞文章近40篇，从平台应用比例来看，应用10XGenomics和BDRhapsody两大平台发文比例各占50%左右，研究类型涵盖疾病发展，靶点探索，免疫研究，神经发育，干细胞分化，植物发育，退行病变，糖尿病，COVID-19等等研究；从发表期刊水平来看，烈冰生物联合发表的单细胞文章，CNS一区期刊占比在30%以上，其中包括immunity三篇，Nature子刊3篇（Naturecellbiology,NaturePlants，Naturecommunication）,风湿类领域ARD期刊1篇，CUT1篇，AdvancedScience多篇，IF大于10分以上文章占比高达68.5%，烈冰专属单细胞测序服务团队，将与您携手谱写下一篇“高分”新文章。

针对单细胞测序的细胞上样数，为什么不建议捕获到的细胞数量越高越好？一味地追求高数量的细胞捕获可能会存在一些问题。例如在上机细胞悬液浓度固定时，如果目标细胞捕获数增加到8000甚至10000，上样细胞悬液体积势必增加，在细胞悬液质量不是很理想（细胞活性5%、结团率均>5%）的情况下，引入的背景信号会增加，分析结果不理想的直接体现包括：cell、non-cell无法有效区分和Fractionreadsincells偏低。当cell和non-cell无法有效区分时，会使得数据出现假阳性和假阴性结果！当目标细胞捕获数很大时，多细胞率会增加，数据分析时，此部分“cell”表现为基因检测数和UMI检测数是正常cell的N倍（N是一个GEM包裹的细胞数），导致所有细胞的统计数据（单个细胞基因检测中位数、单个细胞UMI检测中位数）虚高。此部分“cell”虽然可以通过设置数据分析阈值进行过滤，但是容易会有此类数据的残留和正常高基因检测细胞的人为去除！烈冰一站式单细胞测序服务：立足科学研究，解码生命本质。

什么时候要用到去死细胞的操作呢？跟进烈冰生物多年单细胞测序服务经验来看，当细胞悬液进行质量和活性检测后，考虑对细胞活性在50%-70%的悬液进行去除死细胞的操作。而太低活性的悬液（小于30%），悬液中细胞大量死亡，可能已经丢失了原组织内的细胞比例和状态，失真严重，建议重新收集样本进行新的实验，保证数据的高质量和实验结果的准确性。但需要注意到，去除死细胞的操作会损失一定的细胞数量，因此希望您在提供样本时，尽可能提供足量的细胞，以备实验过程中可能存在的细胞死亡的问题，BDRhapsody单细胞捕获平台对样本起始细胞量的要求较低，一般提供10万个细胞以上均可满足需求，特殊样本可详细咨询烈冰生物。烈冰BD Rahpsody单细胞测序平台，助力您的深入科学探究。宁波single cell 单细胞平台

附加流式分选细胞表面Marker，对于较低分辨率的标志物也能有效鉴定，助力高要求测序项目。上海BD VDJ单细胞测序服务

BDRhapsody单细胞转录组测序是利用单细胞水平上的高通量测序分析基因表达谱的技术，突破传统高通量测序的局限性，针对多种组织类型的样本，采用BD细胞悬液制备protocol组织解离后，单个样本一次上机能捕获500-10000个细胞，基于每个细胞分别建库测序，获得单个细胞的基因结构和基因表达状态，并鉴定细胞的类型，可以在不同样本间从细胞类型的组成和丰度角度进行比较，反映细胞间的异质性，提供足够灵活的定制测定法以满足多种实验需要，并有效缩短实验是时间和降低测序成本。上海BD VDJ单细胞测序服务

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